HPLC TEST
- Ersteller HPLC Test
- Erstellt am
FlämingChili
Habanerolecker
- Beiträge
- 400
Ja - Du ahnst es sicher schon 
seit unserer Unterhaltung gestern Abend - ich bin daran sehr interessiert. Viele Grüße aus dem Fläming.
seit unserer Unterhaltung gestern Abend - ich bin daran sehr interessiert. Viele Grüße aus dem Fläming.
Alexander_Hicks
Hombre
- Beiträge
- 5.624
Interesse besteht auf jeden Fall. Am Ende des Tages muss halt die Methodik passen. Wir haben vor Jahren mit einem "neuen" Labor versucht Schärfe zu Testen. Am Ende waren die Ergebnisse aber alle nicht richtig weil es Probleme mit der Methodik gab.
Vielleicht kannst du mehr Infos geben zu deinem Aufbau und natürlich auch Kosten.
HPLC Test
Chiligrünschnabel
- Beiträge
- 28
Ich hab heute eine Säule 10cm,4.6mm,5um C18 Säule bestellt,
Damit lässt sich Dihydrocapsaicin wohl nicht von Capsaicin trennen lassen, aber für eine Abschätzung dürfte das bereits reichen
Später kann ich versuchen, obs mit ISIS oder Atlantis Säulen besser geht, die kosten aber gut.
@Alexander: was war denn die Methodik, und was hat gefehlt?
Gab es Probleme mit der Extraktion?
Damit lässt sich Dihydrocapsaicin wohl nicht von Capsaicin trennen lassen, aber für eine Abschätzung dürfte das bereits reichen
Später kann ich versuchen, obs mit ISIS oder Atlantis Säulen besser geht, die kosten aber gut.
@Alexander: was war denn die Methodik, und was hat gefehlt?
Gab es Probleme mit der Extraktion?
FlämingChili
Habanerolecker
- Beiträge
- 400
@HPLC Test und @Alexander_Hicks
Habt Ihr Erfahrungen oder eine Meinung zu Folgendem? Wie sieht es mit der Probenaufbereitung und -vorbereitung aus? Kann man davon ausgehen, daß die kleine Probe, die Du dann durch die Säule schickst einen guten Referenzwert ergibt, wenn die Ursprungsmenge aus z.B. einem kg-Sack gezogen wurde? Was meint Ihr - bekäme man die Durchmischung dieses kg-Sackes so perfekt hin, daß man nach der Chromatographie einen relativ exakten Wert fürs Ganze hätte? Das wäre für mich wichtig. Denn ich würde mit dem Wissen des relativ genauen Dihydrocapsaicin- und Capsaicingehaltes im Nachhinein herzustellende Produkte inhaltlich und wirkungsmäßig klarer und reproduzierbarer definieren können. Wenn jede Charge Creme andere Mengen enthalten würde, wäre das nicht sonderlich professionell... Viele Grüße.
Habt Ihr Erfahrungen oder eine Meinung zu Folgendem? Wie sieht es mit der Probenaufbereitung und -vorbereitung aus? Kann man davon ausgehen, daß die kleine Probe, die Du dann durch die Säule schickst einen guten Referenzwert ergibt, wenn die Ursprungsmenge aus z.B. einem kg-Sack gezogen wurde? Was meint Ihr - bekäme man die Durchmischung dieses kg-Sackes so perfekt hin, daß man nach der Chromatographie einen relativ exakten Wert fürs Ganze hätte? Das wäre für mich wichtig. Denn ich würde mit dem Wissen des relativ genauen Dihydrocapsaicin- und Capsaicingehaltes im Nachhinein herzustellende Produkte inhaltlich und wirkungsmäßig klarer und reproduzierbarer definieren können. Wenn jede Charge Creme andere Mengen enthalten würde, wäre das nicht sonderlich professionell... Viele Grüße.
HPLC Test
Chiligrünschnabel
- Beiträge
- 28
Hallo @FlämingChili
klar sollte die Probe repräsentativ sein, aber einfacher gehts, wenn man direkt 3 Proben nimmt, dann fällt die einzelne Probe weniger ins Gewicht, und der Durchschnittswert wird berechnet.
Ich sehe noch weitere Quellen von Unsicherheiten, ist alle Schärfe in der Lösung, Einwägefehler und Verdünnungsfehler.
Aber ich sehe das initial etwas pragmatisch, es geht hier nicht um Prozente, sondern um x-fache Unterschiede. Wenn ich Jalapenos mit Reaper vergleiche ist der Faktor 1000x.
Wenn es genau sein soll, könnte eine Soxklet-Extraktion sinn machen, da kann man theoretisch recht viel Material extrahieren, ich dachte eher an 3 faches zentrifugieren/dekatieren, das dürfte schon recht gut sein.
LG
klar sollte die Probe repräsentativ sein, aber einfacher gehts, wenn man direkt 3 Proben nimmt, dann fällt die einzelne Probe weniger ins Gewicht, und der Durchschnittswert wird berechnet.
Ich sehe noch weitere Quellen von Unsicherheiten, ist alle Schärfe in der Lösung, Einwägefehler und Verdünnungsfehler.
Aber ich sehe das initial etwas pragmatisch, es geht hier nicht um Prozente, sondern um x-fache Unterschiede. Wenn ich Jalapenos mit Reaper vergleiche ist der Faktor 1000x.
Wenn es genau sein soll, könnte eine Soxklet-Extraktion sinn machen, da kann man theoretisch recht viel Material extrahieren, ich dachte eher an 3 faches zentrifugieren/dekatieren, das dürfte schon recht gut sein.
LG
FlämingChili
Habanerolecker
- Beiträge
- 400
Danke, lieber @HPLC Test. Ich habe eine Kupferdestille hier bei mir. Wäre das eine spannende Probenaufbereitung, mit der Du arbeiten könntest? Als Hydrolat wegen der Nichtlöslichkeit in H2O bringts ja nix, aber ich könnte ja mit Alkohol destillieren - müßte man überlegen, wieviel prozentig es sein muß - weniger kostet halt weniger. Evt. wegen der Reinheit hochprozentigen runterverdünnen mit A.dest...
Viele Grüße.
P.S.: Wie sieht es überhaupt mit den Kosten aus? Experimentierst Du "aus Spaß" mit uns zusammen oder möchtest Du das Ganze fürs Forum hier als kommerzieller Partner anbieten?
Viele Grüße.
P.S.: Wie sieht es überhaupt mit den Kosten aus? Experimentierst Du "aus Spaß" mit uns zusammen oder möchtest Du das Ganze fürs Forum hier als kommerzieller Partner anbieten?
HPLC Test
Chiligrünschnabel
- Beiträge
- 28
Hallo @FlämingChili,
Ich rede hier bereits von 99.9 MeOH, oder ACN in passenden Mischungen.
Destillieren hilft aufkonzentrieren, aber damit quantitativ zu Analysieren sehe ich als sehr heikel, und wenn dann eher mit einer Glasapparatur.
HPLC ist ein luxeriöses Hobby, darum wäre Idee schon, dass ich das gegen ein Entgeld anbieten könnte, aber soweit bin ich jetzt noch nicht.
Hier im Forum erfahre ich, was bereits bekannt ist und was Leute wie du wissen möchten.
Ich bin auch schon im Kontakt Händlern von Saatgut und Saucen.
Bis auf weiteres wird das Unterfangen kein zertifiziertes QC Labor sein, dafür aber bezahlbar.
Beste Grüsse
Ich rede hier bereits von 99.9 MeOH, oder ACN in passenden Mischungen.
Destillieren hilft aufkonzentrieren, aber damit quantitativ zu Analysieren sehe ich als sehr heikel, und wenn dann eher mit einer Glasapparatur.
HPLC ist ein luxeriöses Hobby, darum wäre Idee schon, dass ich das gegen ein Entgeld anbieten könnte, aber soweit bin ich jetzt noch nicht.
Hier im Forum erfahre ich, was bereits bekannt ist und was Leute wie du wissen möchten.
Ich bin auch schon im Kontakt Händlern von Saatgut und Saucen.
Bis auf weiteres wird das Unterfangen kein zertifiziertes QC Labor sein, dafür aber bezahlbar.
Beste Grüsse
Balec
Chiligrünschnabel
- Beiträge
- 90
Tach,
Das Thema grenzt schon sehr stark an Lebensmittelchemie, und diese ist aus analytisch-wissenschaftlicher Sicht (sprich: meiner) schon recht harter tobak.
Hier ein paar Fragen dazu:
Wie gehst du mit Matrixproblemen um?
Hast du eine validierte Methode?
Kannst du Angaben zur Präzision oder Reproduzierbarkeit machen?
Gruss,
Das Thema grenzt schon sehr stark an Lebensmittelchemie, und diese ist aus analytisch-wissenschaftlicher Sicht (sprich: meiner) schon recht harter tobak.
Hier ein paar Fragen dazu:
Wie gehst du mit Matrixproblemen um?
Hast du eine validierte Methode?
Kannst du Angaben zur Präzision oder Reproduzierbarkeit machen?
Gruss,
HPLC Test
Chiligrünschnabel
- Beiträge
- 28
Hallo @Balec
Naja, ist wohl genau so! Und danke für die Fragen!
Ich bin nicht sicher, welche Matrix-Probleme du hier siehst.
Das Solvent wird nicht nur Capsaicin extrahieren, ich schätze, dass die Extraktion + Filtration die Proben genügend gut vorbereitet um auf der Säule brauchbare Separation zu erhalten.
Ich werde mich an Publikationen orientieren, hab dazu schon mehrere Vorgehensweisen gelesen.
Naja, die Methode werde ich natürlich benchmarken und auf Robustness testen.
Die Präzision werde ich mit einer Verdünnungsreihe, internem Standard und Spiking kontrollieren.
Wenn ich da durch bin, dürfte die Methode als validiert betrachtet werden, aber das ist noch ein weiter Weg.
Aber ich bin schon tief drin, ich möchte das durchziehen
LG
Naja, ist wohl genau so! Und danke für die Fragen!
Ich bin nicht sicher, welche Matrix-Probleme du hier siehst.
Das Solvent wird nicht nur Capsaicin extrahieren, ich schätze, dass die Extraktion + Filtration die Proben genügend gut vorbereitet um auf der Säule brauchbare Separation zu erhalten.
Ich werde mich an Publikationen orientieren, hab dazu schon mehrere Vorgehensweisen gelesen.
Naja, die Methode werde ich natürlich benchmarken und auf Robustness testen.
Die Präzision werde ich mit einer Verdünnungsreihe, internem Standard und Spiking kontrollieren.
Wenn ich da durch bin, dürfte die Methode als validiert betrachtet werden, aber das ist noch ein weiter Weg.
Aber ich bin schon tief drin, ich möchte das durchziehen
LG
Balec
Chiligrünschnabel
- Beiträge
- 90
@HPLC Test
Die Extraktion ist auch die größte Hürde bei deinem Vorhaben:
Du wirst nicht nur capsaicin extrahieren, sondern auch die restlichen 5 capsaicinoide. Und weil du dafür lipophil arbeiten musst, wirst du auch alle anderen natürlich vorkommenden Fettsäuren mitnehmen. Alles zusammen genommen, wirst du einen Wald als Chromatogramm erhalten = Matrix.
Filtration ist dein Freund UND Feind zugleich, weil du nicht definieren kannst welche der Fettsäuren durchkommen und was im Filter hängen bleibt. Diesen Effekt auf die Quantifizierung kannst du etwas durch iSTD abfedern, wirst aber Abstriche in der Präzision hinnehmen müssen.
Ein weiteres schwerwiegendes Problem wird ausserdem sein, dass die Matrix deine Säulen verstopfen wird, wenn du nicht literweise MeCN/Puffer drüber jagen willst zur Spülung. Bis du rausgefunden hast welche Spülung für _dein_ System passend ist, wird einiges an Kosten anfallen und die eine oder andere Säule wird das Zeitliche segnen.
Für ein Hobby wird das mehr Geld verschlingen, als dir vielleicht bewusst ist. Alleine die Beschaffung und gesetzeskonforme Entsorgung der Massen an Lösemittel und deren Abfälle, würde die meisten mittelständischen Betriebe in den Ruin treiben.
Deine Angaben zur Validierung (auf hobby-niveau) finde ich hingegen ganz sinnvoll.
Konzeptionell könnte dein Vorhaben klappen. Finanziell sehe ich da jedoch zu grosse Hürden für ein Hobby-Projekt.
Versteh mich bitte nicht falsch. Ich wünsche dir, dass es gelingt. Gleichzeitig habe ich mehr Bedenken, dass es tatsächlich umgesetzt werden kann.
Gruss,
Die Extraktion ist auch die größte Hürde bei deinem Vorhaben:
Du wirst nicht nur capsaicin extrahieren, sondern auch die restlichen 5 capsaicinoide. Und weil du dafür lipophil arbeiten musst, wirst du auch alle anderen natürlich vorkommenden Fettsäuren mitnehmen. Alles zusammen genommen, wirst du einen Wald als Chromatogramm erhalten = Matrix.
Filtration ist dein Freund UND Feind zugleich, weil du nicht definieren kannst welche der Fettsäuren durchkommen und was im Filter hängen bleibt. Diesen Effekt auf die Quantifizierung kannst du etwas durch iSTD abfedern, wirst aber Abstriche in der Präzision hinnehmen müssen.
Ein weiteres schwerwiegendes Problem wird ausserdem sein, dass die Matrix deine Säulen verstopfen wird, wenn du nicht literweise MeCN/Puffer drüber jagen willst zur Spülung. Bis du rausgefunden hast welche Spülung für _dein_ System passend ist, wird einiges an Kosten anfallen und die eine oder andere Säule wird das Zeitliche segnen.
Für ein Hobby wird das mehr Geld verschlingen, als dir vielleicht bewusst ist. Alleine die Beschaffung und gesetzeskonforme Entsorgung der Massen an Lösemittel und deren Abfälle, würde die meisten mittelständischen Betriebe in den Ruin treiben.
Deine Angaben zur Validierung (auf hobby-niveau) finde ich hingegen ganz sinnvoll.
Konzeptionell könnte dein Vorhaben klappen. Finanziell sehe ich da jedoch zu grosse Hürden für ein Hobby-Projekt.
Versteh mich bitte nicht falsch. Ich wünsche dir, dass es gelingt. Gleichzeitig habe ich mehr Bedenken, dass es tatsächlich umgesetzt werden kann.
Gruss,
HPLC Test
Chiligrünschnabel
- Beiträge
- 28
@Balec
Danke für deine fachliche Einschätzung!
Mit einem Solvent Gradient hoff ich das meiste von der Säule weg zu bekommen. Werde auch Vorsäulen benutzen.
Die übrigen Peaks dürften egal sein, wenn ich den Capsaicin Peak identifziert habe, weiter weiss ich nicht, ob die Matrix auch bei 281 nm so gut absorbiert und in ähnlichen Mengen enthalten sein werden.
Je nach Chili sollten nur Dihydrocapsaicin und Capsaicin in relevanter Menge vorhanden sein, diese beiden werde ich vielleicht nicht trennen können.
Naja, die Solvents werden nicht das teuerste am Vorhaben sein, da gingen schon mehrere Tausend drauf mit Gerät und Software, und diversem anderen Zeug.
Bezüglich Methode habe ich mich primär hierauf bezogen:
Bis es ein Nebeneinkommen ist, dürft es ein luxury hobby sein
Danke für eure Begleitung,
ich halt euch auf dem Laufenden
LG
Danke für deine fachliche Einschätzung!
Mit einem Solvent Gradient hoff ich das meiste von der Säule weg zu bekommen. Werde auch Vorsäulen benutzen.
Die übrigen Peaks dürften egal sein, wenn ich den Capsaicin Peak identifziert habe, weiter weiss ich nicht, ob die Matrix auch bei 281 nm so gut absorbiert und in ähnlichen Mengen enthalten sein werden.
Je nach Chili sollten nur Dihydrocapsaicin und Capsaicin in relevanter Menge vorhanden sein, diese beiden werde ich vielleicht nicht trennen können.
Naja, die Solvents werden nicht das teuerste am Vorhaben sein, da gingen schon mehrere Tausend drauf mit Gerät und Software, und diversem anderen Zeug.
Bezüglich Methode habe ich mich primär hierauf bezogen:
Bis es ein Nebeneinkommen ist, dürft es ein luxury hobby sein
Danke für eure Begleitung,
ich halt euch auf dem Laufenden
LG
FlämingChili
Habanerolecker
- Beiträge
- 400
@HPLC Test @Balec
Unglaublich, was man alles vergessen kann. Habe vor ca. 30 Jahren täglich mit HPLC in der Spurenanalytik gearbeitet, danach beruflich aber ganz anders weitergemacht. Und anscheinend fast alles vergessen...
Eure spannende Fachsimpelei hört sich nun für mich leider, leider zu mind. 50% nach "böhmischen Dörfern" an...
Aber - ich bleib dennoch dran und freue mich drauf zu lesen, wie es weitergeht bei Dir. Alles Gute & viel Erfolg beim weiteren Forschen und Ausprobieren. GabiGrüße.
Unglaublich, was man alles vergessen kann. Habe vor ca. 30 Jahren täglich mit HPLC in der Spurenanalytik gearbeitet, danach beruflich aber ganz anders weitergemacht. Und anscheinend fast alles vergessen...
Eure spannende Fachsimpelei hört sich nun für mich leider, leider zu mind. 50% nach "böhmischen Dörfern" an...Aber - ich bleib dennoch dran und freue mich drauf zu lesen, wie es weitergeht bei Dir. Alles Gute & viel Erfolg beim weiteren Forschen und Ausprobieren. GabiGrüße.
HPLC Test
Chiligrünschnabel
- Beiträge
- 28
Hallo Chili Fans,
Nach den Feiertagen sind endlich die Vorsäulenhalterung und die passenden Teile dazu eingetroffen.
Heute habe ich extraktionen gemacht und einfach mal wild alles injiziert.
Mich hat recht irritiert, dass das Pulver in Methanol so schlecht löslich ist, ich hab 250mg in 10ml MeOH lösen wollen, aber auch bei 35ml ist noch ein grosses Pellet sichtbar...
Vielleicht sollte ich es doch mit DCM oder ACN probieren. Dass die Peaks überall fast gleich hoch sind, liegt vielleicht auch an der Löslichkeit von Capsaicin in MeOH, dass die Lösung rasch gesättigt ist, und nicht die ganze Schärfe in Lösung geht...
Es brauchte etwas herumprobieren um einen passenden Gradienten zu finden, bis ich wusste wann die Schärfe im Detektor ankommen,
es sind im Moment ziemlich genau 16.5 minuten, und dass ich eine Gruppe von Peaks sehe, weisst darauf hin, dass ich bereits so die einzelnen Capsaicine fast auftrennen kann.
Vielleicht kaufe ich mir demnächst noch einen richtigen chemischen Standard von reinem Dihydrocapsaicin.
Wie versprochen halte ich euch auf dem Laufenden, und damit bin ich jetzt doch weiter als Semillas je gekommen ist?
LG
Nach den Feiertagen sind endlich die Vorsäulenhalterung und die passenden Teile dazu eingetroffen.
Heute habe ich extraktionen gemacht und einfach mal wild alles injiziert.
Mich hat recht irritiert, dass das Pulver in Methanol so schlecht löslich ist, ich hab 250mg in 10ml MeOH lösen wollen, aber auch bei 35ml ist noch ein grosses Pellet sichtbar...
Vielleicht sollte ich es doch mit DCM oder ACN probieren. Dass die Peaks überall fast gleich hoch sind, liegt vielleicht auch an der Löslichkeit von Capsaicin in MeOH, dass die Lösung rasch gesättigt ist, und nicht die ganze Schärfe in Lösung geht...
Es brauchte etwas herumprobieren um einen passenden Gradienten zu finden, bis ich wusste wann die Schärfe im Detektor ankommen,
es sind im Moment ziemlich genau 16.5 minuten, und dass ich eine Gruppe von Peaks sehe, weisst darauf hin, dass ich bereits so die einzelnen Capsaicine fast auftrennen kann.
Vielleicht kaufe ich mir demnächst noch einen richtigen chemischen Standard von reinem Dihydrocapsaicin.
Wie versprochen halte ich euch auf dem Laufenden, und damit bin ich jetzt doch weiter als Semillas je gekommen ist?
LG